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厚朴药材基本情况
厚朴是特产于我国亚热带及北热带的重要药用植物，树皮入药，具有抗菌、消炎、抗胃溃疡、抗氧化等作用，为临床常用中药。《中国药典》年版一部规定，厚朴为为木兰科植物厚朴MagnoliaofficinalisRehdetWils.或凹叶厚朴MagnoliaofficinalisRehd.etWils.var.BilobaRehd.etWils.的干燥干皮、根皮及枝皮。厚朴在我国已有多年药用历史，张仲景个古方含有厚朴者有25个，占11.9%。除临床配方外，厚朴还是《中国药典》年版一部所载的蕾香正气水、蕾香正气口服液、香砂养胃丸、开胸顺气丸、柴胡舒肝丸等20多个常用中成药的主要原料。厚朴入药始载于《神农本草经》，列为中品，谓其“主中风，伤寒，头痛，寒热，惊悸，气血痹，死肌，去三虫”，其后历代重要本草均有记载。以树皮、根皮、花蕾入药，具有行气化湿、温中止痛、降逆平喘的功效，主治消化道疾病。现今厚朴正品为紫油厚朴，习惯称“川朴”；凹叶厚朴习惯称“温朴”。厚朴在生长15至20年后，4～6月剥取，根皮和枝皮直接阴干；干皮置沸水中微煮，堆置阴湿处，“发汗”至内表面变紫褐色或棕褐色时，蒸软，取出，卷成筒状，干燥。干皮呈卷筒状或双卷筒，长30～35cm，厚0.2～0.7cm，习惯称“筒朴”；近根部的干皮一端展开如喇叭口，长13～25cm，厚0.3～0.8cm，习惯称“靴筒朴”。外表面灰棕色或灰褐色，粗糙，有时呈鳞片状，较易剥落，有明显椭圆形皮孔和纵皱纹，刮去粗皮者显黄棕色；内表面紫棕色或深紫褐色，较平滑，具细密纵纹，划之显油痕。质坚硬，不易折断。断面颗粒性，外层灰棕色，内层紫褐色或棕色，有油性，有的可见多数小亮星。气香，味辛辣，味苦。
厚朴是我国大宗中药材之一，主要分布在浙江、福建、安徽、江西、湖南、湖北、广西、重庆、陕西、四川、云南、贵州等12个省。在长期生产实践中，我国的厚朴形成了九大优质道地药材：湖北恩施“紫油厚朴”、湖南道县“道州厚朴”、湖南“安化厚朴”、四川都江堰“川朴”、陕西汉中“紫阳厚朴”、福建“浦城厚朴”、安徽潜山“潜厚朴”、贵州习水“油厚朴”和浙江丽水“紫油贡朴”。现今厚朴有四大优产区：湖北恩施、四川都江堰、浙江景宁和广西资源。川朴主要分布于湖北西部、四川南部、陕西南部及甘肃南部；温朴主要分布于江西、安徽、浙江、福建、湖南、广西及广东北部。多有交叉分布，均有大面积的人工栽培。野生资源较少。
实验背景
厚朴中含有多种化学成分，包括酚类、挥发油类、生物碱类、还含有少量的木兰毒碱、厚朴碱及鞣质等。厚朴的主要成分为酚类物质，国内外学者对这一成分研究最多。厚朴中的酚类含量最高起主要药效的为厚朴酚与和厚朴酚，约占原药材的5%左右，主要来源于厚朴的树皮，根皮，部分也来自于叶中。厚朴中含有挥发油成分，其含量一般为1%左右。不同药用部位的挥发油成分无明显差异，但含量不同。
自版中国药典四部农药残留量测定法中新增第五法，药材及饮片（植物类）中禁用农药多残留测定法，部分中药检测企业反馈厚朴药材由于含有酚类、挥发油类、生物碱类等，基质效应较为严重。因此，建立一种适用于厚朴基质的前处理方法具有重要的实际应用价值。
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适用范围
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本方法参考中国药典版第五法中的固相萃取法方式二，适用于含挥发油和色素较多的中药材农残检测。
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实验步骤
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一
对照品溶液的制备
1.1混合对照品配制
精密量取禁用农药混合1mL，置20mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用；
1.2气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备
取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1mL含1.0mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1mL含0.1μg的溶液。
1.3空白基质溶液的制备
取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。
1.4基质混合对照溶液的制备
分别精密量取空白基质溶液1.0mL(6份），置氮吹仪上，40°C水浴浓缩至约0.6mL，分别加人混合对照品溶液10μL、20μL、50μL、μL、μL、μL，加乙腈稀释至lmL，涡旋混匀，即得。
二
供试品溶液的制备
2.1提取
称取5g厚朴样品，加氯化钠1g，加入50mL乙腈，匀浆处理2分钟，离心后分取上清液，残渣再加50mL乙腈，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3~5mL，加乙腈定容至10mL，摇匀，待净化。
三
净化
SPE柱：SelectCoreHLB-A中药农残专用固相萃取柱（mg/6mL）
净化1：量取直接提取法制备的供试品溶液3mL，过SelectCoreHLB-A中药农残专用固相萃取柱，收集全部净化液，混匀，即得。如净化1方式磺隆类成分回收率较低，可以再结合下面的净化2的回收率数据；
净化2：量取直接提取法制备的供试品溶液5mL，过SelectCoreHLB固相萃取柱，收集全部净化液，混匀；
GC/MS/MS测定：取过固相萃取柱后溶液1mL，加入0.3mL内标溶液，混匀，过PTFE膜，上机分析。
LC/MS/MS测定：取过固相萃取柱后溶液1mL，加入0.3mL水，混匀，过PTFE膜，上机分析。
四
处理后溶液的颜色比对
厚朴提取液过HLB-A柱
厚朴提取液过HLB柱
由上图可以看出，厚朴提取液经过SelectCoreHLB-A中药农残专用柱净化后样品颜色澄清透明，而常规HLB柱净化后样品颜色较深。
五
高效液相色谱-串联质谱法
（岛津LC-MS）
色谱条件
色谱柱：ChromCoreC18-MSPesticides中药农残专用柱(2.1×mm，2.6μm)
流动相：
A：0.1%甲酸水溶液（含有5mmol/L甲酸铵）
B：乙腈/0.1%甲酸水溶液（含有5mmol/L甲酸铵）=95/5
梯度：
时间（min）
流速
（mL/min）
流动相A
（%）
流动相B
（%）
0
0.3
70
30
1
0.3
70
30
12
0.3
0
14
0.3
0
14.1
0.3
70
30
16
0.3
70
30
流速:0.3mL/min
柱温:40℃
进样量:1μL
质谱条件
离子源:电喷雾离子源（Electrosprayionization，ESI）正离子扫描
监测方式：多反应监测（MultipleReactionMonitoring，MRM）
离子源接口电压：4.5kV
雾化气：氮气3.0L/min
加热气：干燥空气10.0L/min
DL温度：℃
加热模块温度：℃
接口温度：℃
干燥气：NL/min
图1：ChromCoreC18-MSPesticides色谱柱30种农药标准品（以甲胺磷计0.μg/ml）的典型谱图
图2：厚朴空白基质加标的典型谱图（SelectCoreHLB净化）
图3：厚朴空白基质加标的典型谱图（SelectCoreHLB-A净化）
从以上厚朴基质加标LC/MS/MS图对比来看，HLB-A处理后的加标样品中大部分农残成分的响应值更大，让分析检测结果更为准确。
六
气相色谱-串联质谱法
（岛津GC-MS）
色谱条件
色谱柱：DB-17MS，30m×0.25mm，0.25μm;
进样口温度：℃；
升温程序：初始温度为60℃，保持1min；以10℃/min升温至℃；再以2℃/min升温至℃，最后以15℃/min升温至℃，保持6min；
载气：高纯氦气（纯度99.%）；
进样方式：不分流进样；
恒压模式：kPa；
进样量：1μL。
质谱条件
电离方式：电子轰击电离源（EI）；
电离能量：70Ev；
传输线温度：℃；
离子源温度：℃；
监测方式：多反应检测模式（MRM）；
溶剂延迟：10.0min。
表1厚朴中33种农药残留的的测定添加回收结果（%）
农残成分
回收率
农残成分
回收率
甲胺磷
98.1%
甲磺隆
96.1%
甲基对硫磷
80.2%
氯磺隆
90.3%
对硫磷
.8%
胺苯磺隆
98.9%
久效磷
.5%
甲拌磷
87.9%
磷胺
99.2%
甲拌磷砜
86.9%
α-六六六
86.7%
甲拌磷亚砜
97.8%
β-六六六
90.9%
甲基异柳磷
93.1%
γ-六六六
89.5%
内吸磷-O
94.5%
δ-六六六
78.0%
内吸磷-S
.6%
2,4-滴滴涕
.3%
克百威
.2%
4,4-滴滴滴
87.4%
3-羟基克百威
.5%
4,4-滴滴涕
68.1%
涕灭威
80.5%
4,4-滴滴伊
62.3%
涕灭威砜
92.2%
杀虫脒
85.2%
涕灭威亚砜
.1%
除草醚
68.2%
灭线磷
79.1%
艾氏剂
72.8%
氯唑磷
.1%
狄氏剂
79.3%
水胺硫磷
87.2%
苯线磷
97.0%
α-硫丹
93.2%
苯线磷砜
.3%
β-硫丹
66.2%
苯线磷亚砜
93.1%
硫丹硫酸酯
98.0%
地虫硫磷
98.7%
氟虫腈
96.8%
硫线磷
96.4%
氟虫腈砜
.6%
蝇毒磷
96.9%
氟虫腈亚砜
99.8%
治螟磷
.4%
氟甲腈
.4%
特丁硫磷
84.5%
o,p-三氯杀螨醇
95.8%
特丁硫磷砜
98.0%
p,p-三氯杀螨醇
65.3%
特丁硫磷亚砜
96.5%
硫环磷
97.4%
甲基硫环磷
97.6%
__注：磺隆类、三氯杀螨醇农残用3mL供试品溶液净化时，回收率偏低，可以另取5mL供试品溶液净化，回收率可以满足药典要求（回收率红色字体代表的是5mL样品过柱）。
七
厚朴过HLB与HLB-ASPE柱的
部分农残基质响应的区别
（左边为HLB，右边为HLB-A）
苯线磷砜
甲拌磷砜
甲基硫环磷
八
实验讨论
通过以上实验数据比对，可以看出SelectCoreHLB-A中药农残专用固相萃取柱对厚朴溶液颜色有很好的净化效果，容易干扰检测的挥发油类物质和酚类物质都得到了较好的净化，不仅保护了分析柱和离子源，还极大的消除了由于基质效应带来的检测灵敏度下降等问题。该方法不需要固相萃取柱活化步骤，提取液直接过柱就可以测定，过柱时间花费不到5分钟，不仅操作便捷，对于33种农残成分的峰形均有明显改善。
END
国家食品质量监督检验中心中药检测实验室已取得年版《中国药典》33种禁用农残、重金属和真菌毒素检测CMA、CNAS资质，可为相关单位提供权威、及时、准确的检测服务。
检测周期：5-7个工作日。
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本文编辑：佚名
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